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本制品专为抗凝全血样品直接进行PCR设计，采用的Blood DNA聚合酶对全血样本中的杂质具有高度耐受性（最高加入全血样品为10%）。在进行血液直扩时，可轻松扩增出4.5kb的gDNA片段。该酶的延伸速度为4kb/min，产物平末端。该制品中已经含有溴酚蓝染料，PCR扩增完毕后可直接点样于琼脂糖凝胶，无需再加入DNA Loading Buffer。

Blood DNA聚合酶具有5'-3'的聚合酶活性、3'-5'的外切酶活性，其保真度为Taq酶的40倍。Blood Buffer Mix中含有独有的增强因子和缓冲系统。使用该制品可以从人抗凝全血中，高灵敏度的直接扩增4.5kb的DNA频段。该制品的扩增速度为4kb/min。

• 由于抗凝全血含有大量的蛋白，在PCR反应结束后，会有大量絮状变性蛋白质，此时用mini离心机短离心10～30s后，再进行电泳，否则会影响电泳的迁移率。
  
• 扩增片段GC含量>60%时，推荐添加5×PCR增强剂至1×浓度，来提升高GC含量的扩增性能。

• 按下表加入各成分配制PCR反应液
  

  成分	用量
  2×Blood Buffer Mix	10μL
  Blood DNA聚合酶(0.4U/μL)	1μL
  上游引物（10μM）	0.25μL
  下游引物（10μM）	0.25μL
  人抗凝全血	0.5μL
  ddH2O	至20μL

  • 2×Blood Buffer Mix：包含反应缓冲盐、独特抗血因子、dNTP、Mg²⁺、溴酚蓝。
    
  • 关于样本的用量：由于引物的扩增效率、产物大小不同，样品的加入量可能会存在差异，推荐的用量为0.5μL，有时需要调整样品的加入量，最高可加入2μL，进行测试。过高的样本加入量，可能会由于样本中抗凝剂的浓度过高，螯合PCR反应体系中的Mg²⁺，而导致扩增失败。
• 推荐的PCR扩增参数
  

  步骤	温度	时间
  		<1kb	1～2kb	>2kb
  预变性	95℃	2min	2min	2min
  循环1 (5个循环)	95℃	10s	10s	10s
  	65℃	30s	45s	30s/kb
  循环2 (23个循环)	95℃	10s	10s	10s
  	55℃	10s	10s	10s
  	72℃	30s	45s	30s/kb
  末延伸	72℃	2min	2min	2min

  • 在实际应用中，引物TM值（50～70℃）范围内均获得良好的扩增。该程序扩增总循环数为28（5+23），如产物扩增亮度不足，则增加循环2的次数到25～28个，通常不宜超过28。
    
  • 如果仍然不能获得良好的扩增结果，则可以改变，循环2中的退火温度为50～65℃（上表中为55℃）。